说明：本文内容均来源于以下论文
《Pulmonary Surfactant Protein A Mediates Enhanced Phagocytosis of Mycobacterium tuberculosis by a Direct Interaction with Human Macrophages》
作者：C D Gaynor, F X McCormack, D R Voelker, S E McGowan, L S Schlesinger
发表于：《The journal of Immunology》，1995年，155卷：5343-5351页
 
Ø Savillex相关PFA实验器皿：
            
      Savillex PFA Jar              PFA Closure                PFA Well
Ÿ Savillex PFA制品优势：极低吸附性及化学惰性利于3D悬浮细胞培养，可干热灭菌。
Ø 论文摘要（翻译）：
在结核分枝杆菌初始感染过程中，到达肺部远端气腔的细菌会在肺表面活性物质存在下被肺泡巨噬细胞吞噬。本研究探讨了表面活性物质相关蛋白A（SP-A）在人单核细胞源性巨噬细胞（MDMs）和人肺泡巨噬细胞（HAMs）对强毒株Erdman结核分枝杆菌吞噬中的作用。
实验结果显示：
1. 使用肺泡蛋白沉积症患者来源的可溶性SP-A（APP SP-A4）和大鼠重组SP-A（SP-Ahyp）预处理的巨噬细胞单层，结核分枝杆菌粘附率分别提高82±17%和49±18%；
2. 在添加细菌前洗去SP-A并不减弱这种增强的粘附作用；
3. 荧光显微镜证实洗涤后的单层细胞含有内化而非表面结合的SP-A。
这些结果表明SP-A通过与巨噬细胞的直接相互作用介导结核分枝杆菌粘附增强。进一步实验发现：
· 在人源或大鼠SP-A基质上培养的巨噬细胞单层，其顶端表面结核分枝杆菌粘附显著增强（APP SP-A和天然大鼠SP-A分别使粘附率提高102±16%和102±25%）；
· 电镜观察显示APP SP-A处理的MDM切片中吞噬细菌数量增加；
· 去糖基化SP-A蛋白不能增强细菌粘附，而热变性的APP SP-A仍保持与完整糖蛋白相当的促粘附能力，提示SP-A的糖基化修饰对其与巨噬细胞相互作用至关重要。
关键发现：
甘露聚糖和抗甘露糖受体抗体能完全抑制APP SP-A增强的结核分枝杆菌吞噬作用，证实SP-A可上调巨噬细胞甘露糖受体活性。这些研究结果表明SP-A作为肺泡巨噬细胞功能的重要调节因子，可促进结核分枝杆菌进入其胞内存活生态位。
Ø 材料与方法（翻译节选）：
实验方法
1. 外周血单核细胞（PBMC）的分离与巨噬细胞分化
· 供体选择：血液样本来自4名健康成年志愿者，均符合以下条件：
o 结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）皮肤试验阴性
o 无结核病临床病史
o 无已知结核病例接触史
· PBMC分离：
o 采用肝素抗凝全血，经Ficoll-泛影钠（Pharmacia Fine Chemical，Piscataway, NJ）密度梯度离心法分离PBMC。
o 将PBMC（1.5-2.0×10⁶个细胞/mL）接种于聚四氟乙烯培养罐（Savillex Corp., Minnetonka, MN）中，在含20%自体血清的培养基中培养5天[1]。
· 单核细胞源性巨噬细胞（MDM）纯化：
o 实验当天，收集PBMC并充分洗涤。
o 在含RPMI-HEPES-HSA的培养基中，将细胞接种于经Chromerge（Fisher Scientific Co.）处理的玻璃盖玻片上（24孔平底板，Linbro, Flow Laboratories, McLean, VA），贴壁2小时以纯化MDM。
o 每孔接种1.5×10⁶个单核细胞。
2. 肺泡巨噬细胞的获取
· 供体选择：健康非吸烟志愿者，PPD皮肤试验阴性。
· 支气管肺泡灌洗（BAL）：
o 采用经机构审查委员会（IRB）批准的标准化程序进行。
o 从灌洗液中分离肺泡巨噬细胞，所有洗涤和重悬细胞的操作均不使用抗生素。
分离当天即用于实验，每孔接种5.0×10⁵个巨噬细胞。
[1] Schlesinger, L. S. 1993. Macrophage phagocytosis of virulent but not attenuated dition to complement receptors. J. lmmunol. 150:2Y20. strains of Mycobacterium tuberculosis is mediated by mannose
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