Savillex PFA制品在医学研究上的应用案例（十）
——SP-A和表面活性脂质在较长时间内抑制TLR4激活所致促炎细胞因子产生的分子机制研究
 
说明：本文内容均来源于以下论文
《Pulmonary surfactant protein A and surfactant lipids upregulate IRAK-M, a negative regulator of TLR-mediated inflammation in human macrophages》
作者：Huy A. Nguyen, Murugesan V. S. Rajaram，Douglas A. Meyer and Larry S. Schlesinger
发表于：《Am J Physiol Lung Cell Mol Physio》2012 年第 303 卷：L608 - L616 页
 
Ø Savillex相关PFA实验器皿：
            
      Savillex PFA Jar              PFA Closure                PFA Well
Ÿ Savillex PFA制品优势：极低吸附性及化学惰性利于3D细胞培养，可干热灭菌。
Ø 论文摘要（翻译）：
肺泡巨噬细胞（AMs）作为典型的替代激活型巨噬细胞，因其独特的生物学特性而频繁暴露于吸入颗粒物和微生物的挑战中，并通过高度调控的免疫反应发挥第一道防线作用。肺集合素（特别是表面活性蛋白A，SP-A）通过精细调节巨噬细胞炎症反应参与这一激活状态。短期（10分钟-2小时）暴露时，SP-A通过降低促炎细胞因子产生所需激酶的活性来调控人巨噬细胞反应。然而，肺泡巨噬细胞持续暴露于表面活性物质环境中，而长期抑制促炎细胞因子活性的生化途径尚不明确。本研究探讨了SP-A和表面活性脂质在较长时间内抑制Toll样受体4（TLR4）激活所致促炎细胞因子产生的分子机制。
研究发现：
· 人巨噬细胞暴露于SP-A 6-24小时可上调IL-1受体相关激酶M（IRAK-M）的表达，该分子是TLR介导的NF-κB激活的负向调节因子；
· 不含SP-A的天然牛肺提取物Survanta也能增强IRAK-M表达，但幅度较低且持续时间较短；
· 表面活性物质介导的巨噬细胞IRAK-M上调可抑制TLR4介导的LPS诱导TNF-α和IL-6产生，而小干扰RNA敲低IRAK-M可逆转此抑制；
· 与TNF-α和IL-6相反，表面活性成分上调LPS介导的免疫调节性IL-10产生，该效应同样可被IRAK-M敲低所逆转。
结论表明，这些数据确定了表面活性物质用于调控肺泡长期炎症反应的重要信号调节机制——即增强IRAK-M活性。
Ø 材料与方法（翻译节选）：
人单核细胞源性巨噬细胞与肺泡巨噬细胞的分离培养
本研究采用经俄亥俄州立大学机构审查委员会批准的方案，从结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）阴性的健康志愿者体内制备单核细胞源性巨噬细胞（MDM）单层。具体步骤如下：
1. 细胞分离阶段：
· 通过肝素抗凝血经Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞（PBMCs）
· 将细胞接种于聚四氟乙烯培养罐（Savillex, Minnetonka, MN）
· 在含20%自体血清条件下培养5天
2. 细胞纯化阶段：
· 培养结束后将培养罐冰浴30分钟
· 洗涤收集PBMCs
· 在含10%自体血清条件下，将MDMs接种于12或24孔组织培养板（Falcon,Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ)
· 37℃、5% CO₂环境下贴壁培养2-3小时
3. 后续处理：
· 洗涤去除淋巴细胞
· 更换为含10%自体血清的RPMI培养基
· 继续孵育过夜后用于实验
（注：MDM转染实验与共聚焦显微镜研究的详细条件将在下文阐述）
 
说明：以上仅为论文部分内容节全，如需了解更多内容或获取原文可添加客服微信chinyeetech