说明：本文内容均来源于以下论文
《The S2 Gene of Equine Infectious Anemia Virus Is Dispensable for Viral Replication In Vitro》
作者：FENG LI, BRIDGET A. PUFFER, AND RONALD C. MONTELARO
发表于：《JOURNAL OF VIROLOGY》1998 年 10 月，第 8344 - 8348 页
 
Ø Savillex相关PFA实验器皿：
            
      Savillex PFA Jar              PFA Closure                PFA Well
Ÿ Savillex PFA制品优势：极低吸附性及化学惰性利于3D悬浮细胞培养，可干热灭菌。
Ø 论文摘要（翻译）：
马传染性贫血病毒（EIAV）在慢病毒中具有最简单的基因组，除了典型的gag、pol和env基因外，仅编码三个推定的调控基因（S1、S2、S3），这可能反映了其对单核细胞/巨噬细胞系的有限嗜性。S1和S3的功能已分别被确定为Tat和Rev，但S2基因的具体功能尚未确定。因此，我们使用感染性分子病毒克隆EIAVUK研究了S2在体外病毒复制中的功能。构建了多种缺失S2的EIAVUK突变体，并在几种马细胞培养系统（包括天然体内靶标马巨噬细胞）中检测了它们的复制动力学。在所有测试的原代和永生化马细胞培养物中，EIAV S2突变体都显示出与亲本病毒相似的复制动力学，且未检测到突变体基因组的回复。EIAVUK突变体在马血单核细胞分化-成熟系统中也显示出与亲本病毒相似的复制动力学。这些结果首次证明EIAV S2基因不是必需的，并且在体外靶细胞中似乎不影响病毒感染和复制特性。
Ø 材料与方法（翻译节选）：
A. 马巨噬细胞感染实验
• 马源巨噬细胞（MDM）按文献方法从肝素抗凝全血中分离制备
• 以0.01感染复数（MOI）分别接种亲本毒株EIAVUK和指定突变毒株
• 每日通过检测培养上清逆转录酶（RT）活性监测病毒产量
B. 单核/巨噬细胞分化系统实验
1. 细胞准备阶段：
· 新鲜分离马外周血单个核细胞（PBMCs）
· 接种于聚四氟乙烯培养罐（Savillex, Minnetonka, Minn.）
· 采用无血清MEMα培养基（Gibco BRL），细胞密度3×10⁶/ml
· 37℃、6% CO₂条件下培养维持非贴壁单核细胞
2. 病毒感染阶段：
· 分别以0.01 ICD/细胞的MOI接种EIAVUK和EIAV.2M/X毒株
· 37℃、6% CO₂条件下感染2小时（每组设三个重复孔）
· 洗涤两次去除胞外病毒
· 更换为含10%马血清的MEMα培养基，继续在聚四氟乙烯罐中培养过夜
3. 分化监测阶段：
· 次日转种至48孔组织培养板（Corning）
· 经两次培养基洗涤去除非贴壁/弱贴壁细胞
· 保留的贴壁单核/巨噬细胞在37℃、6% CO₂条件下继续培养
· 每日通过检测培养上清RT活性监测病毒产量
[技术参数说明]
1. 培养条件：恒温37℃、6% CO₂环境
2. 关键浓度：初始细胞密度3×10⁶/ml，血清浓度10%
3. 检测指标：逆转录酶（RT）活性定量分析
4. 实验对照：设置三重复孔确保数据可靠性
 
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